通用的将HPLC 方法转换为UPLC 方法有以下三个步骤：

1. 选择与药典方法指定色谱柱相当的HPLC色谱柱，并运行药典中具体品种的各论方法

2. 使用方法转换公式将HPLC方法转换为UPLC方法

3. 按照药典要求，对转化后的UPLC方法进行评价

HPLC色谱柱选择

选择等效的色谱柱成为转换的首要条件，这也是方法转换的难点之一。《中国药典》并未对色谱柱做出详细指示，为了准确选择与药典各论中指定的色谱柱类型性能相当的色谱柱，如果药典各论方法中没有规定色谱柱的具体品牌和规格，一般需要进行色谱柱的筛选实验，以便选出一款符合药典方法要求的色谱柱，通常情况下，这是一个比较耗时的工作。

HPLC/UPLC方法转换

针对两者的差异进行转换研究:色谱柱填料粒径不同、系统体积不同、仪器输送流动相系统内径不同，将会影响到流速、进样量、梯度洗脱程序，因此需要对这三个参数进行调整。

 1. 流速的改变 

流速主要是指流动相在色谱柱中的线速度，与色谱柱内径dc有关，流速的计算公式为：

目标流速=（原方法流速*目标柱内径²*原粒径）/原色谱柱内径²/现粒径

流速的调整需要注意不改变线速度

 2. 进样量的改变 

由于UPLC上使用的色谱柱柱体积一般比普通HPLC上小很多，所以载样量也会有所降低，如果这时不减小进样量，有可能造成样品过载或溶剂效应。而进样量与柱体积成正相关。

目标进样体积=原方法进样体积*目标柱体积/原色谱柱体积

进样量的改变需要注意不改变供试液的浓度

 3. 梯度洗脱程序转换 

梯度洗脱需调整梯度洗脱程序。

通常色谱仪器均配备转换软件，输入原始洗脱程序，软件可自动计算并转换为目标仪器的洗脱程序。

当然，UPLC/HPLC的转换还有着更多的奥秘，不同的变量都对方法转移有着不同程度的影响，为了更加深入的探究，药融圈联合沃特世共同邀请到南京药石科技股份有限公司 CMC分析部分析总监张明以及沃特世科技（上海）有限公司大中华区资深应用工程师楚朋飞，在2023年3月27日药融云端直播间，共同探讨分析UPLC的使用策略，希冀能在HPLC/UPLC方法转移时提供助力。